分享一篇發(fā)表在Analytical Chemistry上的文章，題目為“Gas Phase Separation of Modified Peptides for Activity-Based Protein Profiling”，通訊作者是來自康奈爾大學(xué)的Jacob B. Geri教授，他在學(xué)士、博士期間研究無機(jī)化學(xué)和有機(jī)化學(xué)，在博士后期間及之后則研究高通量、時空分辨的蛋白質(zhì)相互作用新技術(shù)。本文開發(fā)了一種氣相分離技術(shù)用于ABPP分析。
分析反應(yīng)性蛋白質(zhì)組對了解生理病理過程是至關(guān)重要的，其中最常用的技術(shù)是ABPP技術(shù)。由于蛋白質(zhì)組學(xué)樣品中蛋白質(zhì)豐度差異很大，質(zhì)譜硬件的分析速度有限，因此對少量樣品進(jìn)行活性分析仍然是具有挑戰(zhàn)性的。
為了在位點(diǎn)水平分析蛋白質(zhì)組反應(yīng)性，通常需要在大量未修飾肽中分辨修飾肽信號。傳統(tǒng)的方法使用鏈霉親和素珠等固體介質(zhì)來富集修飾肽，作者認(rèn)為這種方法操作繁瑣且會造成分析物損失。本文開發(fā)了一種替代方法timShift，該方法是一種基于氣相的分離手段，用于增強(qiáng)反應(yīng)性位點(diǎn)分析。作者衍生了常用的碘乙酰胺炔基探針，使其能夠增加標(biāo)記肽的離子遷移率，在淌度分析過程中將修飾肽和未修飾肽分開，并能在蛋白質(zhì)組中進(jìn)行靶向測序和定量。
作者提出可以增加肽的電荷來增加其離子遷移率，從而可以在淌度分離過程中進(jìn)行分離，為此，作者篩選了多種候選試劑，其中下圖展示的這種官能團(tuán)可以使修飾肽區(qū)域（紅色）與非修飾肽區(qū)域（黑色）實(shí)現(xiàn)最好的分離，因此作者選擇了這種遷移試劑。
作者使用該方法鑒定了多于8,200個反應(yīng)性半胱氨酸位點(diǎn)，并在低至20ug的起始量的前提下證明該方法相比于脫硫生物素-鏈霉親和素富集具有更高的靈敏度。
作為應(yīng)用，作者用特定靶標(biāo)Pin1的特異性共價抑制劑磺胺類藥物對timShift進(jìn)行評估，展示了反應(yīng)性半胱氨酸數(shù)據(jù)，與此前的報道相符。另外，作者在96孔板中對31個選擇性親電子試劑進(jìn)行了高通量篩選，展現(xiàn)了方法的便捷、快速的特點(diǎn)。
總之，本文提出了一種基于氣相的分離手段，可以代替鏈霉親和素珠等分離步驟，在ABPP實(shí)驗(yàn)中有很好的效果。
本文作者：WYJ
責(zé)任編輯：LYC
DOI：10.1021/acs.analchem.5c03300
原文鏈接：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.5c03300
