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為了系統(tǒng)準確地評價桉葉多酚提取物抗氧化活性，華南農(nóng)業(yè)大學食品學院，廣東省功能食品活性物重點實驗室，廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心的李 偉、葉嘉宜、曹 庸*等人采用傳統(tǒng)的化學評價方法，并建立氧化損傷RAW264.7巨噬細胞模型，結(jié)合秀麗隱桿線蟲（以下簡稱線蟲）模型，全面評價純化后桉葉多酚抗氧化能力，為桉葉多酚提取物開發(fā)成功能性食品或食品抗氧化劑提供理論依據(jù)。

由圖2A可知，桉葉多酚提取物和抗壞血酸的DPPH自由基清除率隨著質(zhì)量濃度增大呈劑量依賴性增大；桉葉多酚提取物和抗壞血酸半抑制質(zhì)量濃度（IC₅₀）分別為0.06 mg/mL和0.021 mg/mL。當桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時，最大清除率為（93.09±5.38）%，這也說明桉葉多酚提取物在一定質(zhì)量濃度時具有良好的DPPH自由基清除能力，此時與抗壞血酸無明顯差異。桉葉多酚提取物的清除機理可能是多酚中具有多種供氫體，能將DPPH自由基還原成黃色的DPPH—H；隨著桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度增高，供氫能力增強，表現(xiàn)出高效的DPPH自由基清除率和更低的IC₅₀。

由圖2B可知，隨著樣品質(zhì)量濃度增大，桉葉多酚提取物和抗壞血酸ABTS陽離子自由基清除能力逐漸增強；其中抗壞血酸大于0.1 mg/mL時清除率達到平穩(wěn)期，IC₅₀為0.016 mg/mL，而桉葉多酚提取物IC₅₀為0.052 mg/mL。清除ABTS陽離子自由基的原理與清除DPPH自由基不同，主要是電子轉(zhuǎn)移的過程；ABTS也更容易反應，因為它既親水也親脂。

由圖2C可知，本實驗采用鄰苯三酚自氧化法測定桉葉多酚提取物超氧陰離子自由基清除能力，清除效果呈量效關(guān)系，多酚含量越高，清除能力越強；桉葉多酚提取物IC₅₀為0.056 mg/mL，而抗壞血酸為0.025 mg/mL。當桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL，清除超氧陰離子自由基能力與抗壞血酸無明顯差異。

由圖3可見，相比于對照組，當桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度在12.5～100 μg/mL時，細胞活性均高于90%，且在12.5～50 μg/mL范圍內(nèi)具有一定促進細胞增殖的效果；當桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度在200～800 μg/mL時，細胞活性受到顯著抑制（P＜0.05）。因此選擇12.5、25、50 μg/mL作為后續(xù)實驗的桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度。

由圖4可見，模型組細胞存活率極顯著低于對照組（P＜0.01），此時細胞活性為（51.67±9.77）%，說明造模成功。此外，桉葉多酚提取物處理組細胞活性隨質(zhì)量濃度增大呈上升趨勢，其中25 μg/mL和50 μg/mL桉葉多酚提取物組細胞活性分別顯著高于模型組27.94%和37.66%（P＜0.05，P＜0.01）；這說明桉葉多酚提取物具有良好的抗氧化效果，能減輕細胞氧化損傷，有效保護細胞。

桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度篩選

圖6A表明，隨著桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度增大，線蟲體內(nèi)ROS積累量逐漸降低；相比于對照組，當桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度為100 μg/mL和200 μg/mL時，ROS積累量分別下降24.61%和30.48%（P＜0.05）。此時，兩個質(zhì)量濃度桉葉多酚提取物組間無顯著差異（P＞0.05），因此選用100 μg/mL開展后續(xù)實驗。為了進一步研究桉葉多酚提取物在線蟲氧化應激狀態(tài)下是否起作用，實驗將同期化后的線蟲（100 μg/mL桉葉多酚提取物培養(yǎng)96 h）在1 mmol/L H₂O₂下刺激24 h，測定線蟲體內(nèi)ROS積累量。如圖6B所示，H₂O₂處理組線蟲ROS積累量極顯著高于對照組（P＜0.01），說明H₂O₂處理后線蟲發(fā)生氧化損傷；而桉葉多酚提取物處理后的線蟲體內(nèi)ROS積累量極顯著下降29.97%。

由圖7可知，相比于對照組，桉葉多酚提取物組線蟲生存曲線發(fā)生高度顯著右移（P＜0.01），說明桉葉多酚提取物處理后線蟲整體壽命高于對照組。表1顯示桉葉多酚提取物組線蟲最長壽命和中位壽命均顯著高于對照組（P＜0.05），分別提高14.12%和14.03%。推測桉葉多酚提取物良好的抗氧化活性間接起到延長線蟲壽命的作用。