選柱子的依據(jù)是什么?
這里有一個(gè)進(jìn)樣公式，即：J =Z×0.208%×N
1）進(jìn)樣量用漢語(yǔ)拼音的J來(lái)表示；Z為硅膠裝填量
2）擬將ΔRf的差值精確到0.01，那么0.01的差值設(shè)置為1個(gè)單位，用N來(lái)表示；
3）進(jìn)樣系數(shù)：0.208%，是基于40-60um粒徑（300-400目），60A孔徑的硅膠，在特定的壓力條件、理想流速下，計(jì)算出的理想進(jìn)樣系數(shù)?？紤]到實(shí)際使用過(guò)程中樣品裝樣不平、操作誤差大等因素，以0.2%代替，更接近于實(shí)際；
舉個(gè)例子：80g的柱子在如下條件中可分離多少樣品？
薄層數(shù)據(jù)：Rf1=0.19，Rf2=0.33
則N=（0.33-0.19）÷0.01=14
按公式計(jì)算，J=80×0.2%×14=2.24g，則，該樣品依照此薄層數(shù)據(jù)，80g柱子最大進(jìn)樣量為2.24g。
再來(lái)一個(gè)例子算算看。
薄層數(shù)據(jù)：Rf1=0.25，Rf2=0.21，120g的柱子能分多少樣品？
N=（0.25-0.21）÷0.01=4
進(jìn)樣量J=120×0.2%×4=0.96g
不難看出，ΔRf差值越小，進(jìn)樣量就越少。我們應(yīng)根據(jù)目標(biāo)物與雜質(zhì)的分離度（ΔRf的差值）來(lái)選擇使用何種規(guī)格的柱子。
該進(jìn)樣公式可優(yōu)化為：J=Z×0.2×ΔRf，
即：進(jìn)樣量=硅膠量（實(shí)際克數(shù)）×0.2×Rf的差值
用什么方法分離?
選好了合適的柱子，那么，該怎么設(shè)定分離方法呢？這里有一個(gè)非常經(jīng)典的方法。
線性梯度法：
初始溶劑比例=（薄層跑板的比例÷4）
最終溶劑比例=（薄層跑板的比例×2）
第一部分：初始比例，走1柱體積
第二部分：從初始比例線性漸增至最終比例，走11個(gè)柱體積
第三部分：最終比例，走2個(gè)柱體積。
如圖所示
例如：跑板的溶劑系統(tǒng)是石油醚：乙酸乙酯=4：1，即乙酸乙酯的含量是20%，那么走線性梯度的初始溶劑比例為20%÷4=5%乙酸乙酯，走1個(gè)柱體積；然后從5%逐漸遞增到20%×2，即40%，這個(gè)漸增的過(guò)程共計(jì)11個(gè)柱體積；最后以40%的比例走兩個(gè)柱體積，結(jié)束，共計(jì)14個(gè)柱體積！
注意：這個(gè)方法對(duì)泵的精度要求很高，溶劑調(diào)節(jié)比例的準(zhǔn)確度在1%以?xún)?nèi)。如biotage公司的isolera one；isco公司的RF200均可達(dá)到要求。如果您用的是國(guó)產(chǎn)的設(shè)備，或者精度比較差的設(shè)備（如isolera prime、RF75等），請(qǐng)將此方法的最終溶劑比例調(diào)節(jié)為：薄層跑板的比例×1.5，其他條件不變。
實(shí)驗(yàn)人員可以根據(jù)自己樣品及過(guò)柱情況來(lái)增加或減少實(shí)際過(guò)柱柱體積數(shù)。
特別需要說(shuō)明的是：根據(jù)薄層板數(shù)據(jù)建立的這個(gè)方法的前提條件是：爬板溶劑比例應(yīng)能將目標(biāo)物的Rf值落在0.1-0.4之間??！
理論進(jìn)樣量表
進(jìn)樣量的單位是g
來(lái)源：小木蟲(chóng)
